實驗意義
1.可應(yīng)用于闡明基因組結(jié)構(gòu)與功能以及基因之間相互作用的科學(xué),對于探索基因在生命活動中的作用及其機制具有重要意義。
2.能夠為一些疾病提供新的診斷方法和治療方法，可有助于醫(yī)生獲得更多治療信息并進行個性化精準(zhǔn)醫(yī)療。
實驗原理及步驟
1. siRNA的設(shè)計和選擇:根據(jù)研究目的選擇合適的數(shù)據(jù)庫及軟件篩選靶序列的siRNA,通常需要設(shè)計多個siRNA,找到zui you zui有效的siRNA序列;
2. siRNA的制備:常用的體外制備方法有化學(xué)合成、體外轉(zhuǎn)錄、長片段dsRNA經(jīng)RNase Il類降解，以及通過siRNA表達質(zhì)粒載體或者病毒載體以及PCR制備的siRNA表達框架(siRNA expression cassettes, SECs)在細(xì)胞中表達制備siRNA;
3. siRNA的轉(zhuǎn)染: siRNA. siRNA表達載體或者siRNA表達框架轉(zhuǎn)染進入細(xì)胞的方法主要有磷酸鈣共沉淀轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染機械法(顯微注射和基因槍) . 陽離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染;
4.檢測靶基因的表達: WB等方法檢測靶基因的表達或者可以通過標(biāo)記siRNA(如熒光標(biāo)記)分析其表達，還可用作siRNA胞內(nèi)定位和雙標(biāo)記實驗來追蹤轉(zhuǎn)染過程以及靶基因表達沉默過程。
實驗周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實驗周期: 2-4周
2.交付標(biāo)準(zhǔn):質(zhì)粒、片段驗證結(jié)果、實驗報告(實驗步驟.試劑、儀器等)
需確認(rèn)的信息
1.基因的種屬及ID號
2.基因序列
實驗代做服務(wù)：
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動物模型服務(wù) |
流式細(xì)胞檢測 | 細(xì)胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實驗 |
細(xì)胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實驗 | microRNA 測序 |
動物實驗 | Taqman探針 | ATP/ADP檢測
| 石蠟/冰凍切片 |
定點突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測 | 細(xì)胞生長曲線的測定 | 藥理毒理動物實驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構(gòu)建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標(biāo)定量（Label-free）實驗 |
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